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脂蛋白相关磷脂酶A2Lp-PLA2

脂蛋白相关磷脂酶A2Lp-PLA2

Holmes助力开发更好的
Lp-PLA2产品

 

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是近几年比较热门的血管特异性炎症标志物,通过检测该物质在血液中的水平,可以有效了解动脉内粥样硬化斑块的炎症程度,预测人心脑血管疾病的发生和发病程度,有利于心脑学管疾病的诊断和预防[1-2]

Holmes现推出大包装Lp-PLA2试剂(酶法和胶乳法)及其核心原料(抗原、抗体和底物),助力于大家开发出更好的产品。

 

1. Lp-PLA2生物学特性及市场情况

Lp-PLA2是磷脂酶超家族中的亚型之一,也被称为是血小板活化因子乙酰水解酶,由441个氨基酸组成的脂酶,其活性成分由丝氨酸、组氨酸和天冬氨酸组成,主要由血管内膜中的巨噬细胞、T细胞和肥大细胞分泌[3]。动脉粥样硬化斑块中Lp-PLA2表达上调,并且在易损斑块纤维帽的巨噬细胞中强表达[4-5]

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Lp-PLA2可水解氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)中的氧化磷脂,生成脂类促炎物质,进而产生多种致动脉粥样硬化的作用,包括内皮细胞凋亡和内皮功能异常,刺激黏附因子和细胞因子的产生。这些物质可通过趋化炎症细胞进一步产生自我强化的循环,生成更多促炎物质;释放到血液循环中的Lp-PLA2主要与富含载脂蛋白B的脂蛋白结合,低密度脂蛋白占80%,其余与高密度脂蛋白、脂蛋白a 和极低密度脂蛋白结合[6-7]

目前已有很多可供临床检测使用的商品化试剂盒,截止日前,从CFDA官网上可查询到有40多个Lp-PLA2临床注册证,包含酶联法(4个)、免疫层析法(17个)、速率法(8个)、免疫比浊法(12个)和化学发光法(3个)等五种方法学。不同方法学检测原理也不相同,主要分为检测蛋白浓度和酶活力两种,近期发表在《临床化学》上的一篇文章[8] 对于Lp-PLA2蛋白浓度和酶活力的相关性做了很好的阐述。此研究发现,利用串联质谱技术(LC-MS/MS)检测Lp-PLA2的活性与浓度,两者结果呈现出良好的相关性。而之前市场上反馈出现浓度与活性相关性不好的原因是:Lp-PLA2与脂蛋白的结合会影响抗体的识别,导致浓度检测结果异常。通过表面活性剂释放与脂蛋白结合的Lp-PLA2,再检测其浓度,则表现出与活性良好的相关性[8]。 

 

2. Holmes产品信息

2.1 抗原、抗体和底物

Holmes的Lp-PLA2抗原,采用大肠杆菌(原核)和HEK293哺乳细胞两种重组方式表达制备。原核抗原表达量高,均一性好,价格低廉,可以降低试剂成本,可以被本公司的Lp-PLA2单抗识别,用于校准品/质控品的制备;HEK293哺乳细胞表达的抗原具有糖基化修饰,更接近天然抗原,酶活性更高,适合用于各类抗体的筛选及评价。

Holmes的鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体具有反应度强、特异性高和抗干扰能力强等优点,已通过ELISA、免疫层析、胶乳免疫比浊等多个平台的验证,可用于定量免疫分析系统检测人体样本中的Lp-PLA2蛋白浓度。

Holmes的Lp-PLA2底物,于2018年底首次对外销售,具有高纯度,高活性的特点。同时,全新优化的底物结构在稳定性上优于市场上同类产品,较好的解决了Lp-PLA2酶法试剂的稳定性问题。  

 

鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体
推荐配对 货号 克隆号 用途 来源 亚类 使用方法
配对1 C01M015 F1502 包被 Balb/C 小鼠 lgG2b ELISA、免疫层析
F1504 标记
配对2 C01M015 F1501 包被 Balb/C 小鼠 lgG1 ELISA、免疫层析、乳胶
配对3 C01M015 F1503 包被 Balb/C 小鼠 lgG1 ELISA、免疫层析、乳胶
F1501
Lp-PLA2抗原
货号 来源 纯度 应用
C01A022 E.coli,Recombination ≥90% 校准品/质控品
C01A023 HEK293,Recombination ≥80% 校准品/质控品
Lp-PLA2底物
货号 分子量 纯度 应用
I031F001 688.74/mol ≥95% 酶法

2.2 Holmes LP-PLA2大包装试剂推荐

Holmes具有专业的酶分析和免疫比浊(包括胶乳增强)诊断技术和研发团队。首席科学家Doctor Edwin具有二十年以上的诊断试剂研发经验,已带领团队成功开发出几十种诊断产品,涵盖不同的疾病领域,经过数年研发经验的积累和沉淀,在新项目研发上具有绝对的优势。

为满足市场上对LP-PLA2生化试剂的需求,Holmes推出了两款具有极高性价比的LP-PLA2生化大包装试剂,具体技术性能参数详见
下表:

 

OEM 生化大包装
方法学 酶法 乳胶法
试剂比例 血清 血清
样本类型 3:1 4:1
试剂样本比 240:80:2 160:40:8
分析类型 终点法 终点法
主波长 405nm 546nm
副波长 505nm /
参考范围 <659 IU/L ≤175 ng/mL
线性范围 10-1500 IU/L 20-1000 ng/mL
空白吸光度 波长405 nm±10 nm,光径10 mm时,
试剂空白吸光度值应≤1.000
在主波长546nm,光径1 cm时,
试剂空白吸光度A≤2.0000
精密度 批内 CV≤5%, 批间CV≤10% 批内 CV≤5%, 批间CV≤10%
准确度 相对偏差的绝对值≤10% 相对偏差的绝对值≤10%
灵敏度 在检测范围内,试剂分析灵敏度
应≥0.02 mA•L/IU
在检测范围内,试剂分析灵敏度
应≥0.02 mA•L/IU

 

3. 参考文献

[1] Mann DM, Shimbo D, Cushman M,et al. C-reactive protein level and the incidence of eligibility for statintherapy: the multiethnic study of atherosclerosis[J]. J Clin Cardiol, 2013, 36(1):15-20.

[2] Blackie JA, Bloomer JC, Brown MJ, et al. thediscovery of SB-435495. A potent, orally active inhibitor of lipoprotein-associated phospholipase A2 for evaluation in man[J]. Bioorg Med Chem Lett, 2002, 12(18): 2603-2606.

[3] Burke J, Dennis E. Phospholipase A2 biochemistry. Cardiovasc Drugs Ther, 2009, 23: 49-59. 

[4] Mohler L R, Davidson M H. Darapladib lnvestigators: the effect of darapladib on plasma lipoprotein-associated phospholipase A2 activity and cardiovascular biomarkers in patients with stable coronary heart disease or coronary heart disease risk equivalent: the results of a multicenter, randomized, double blind, placebo controlled study[J]. J Am Coll Cardiol, 2008, 51(17): 1642-1644.

[5] Maiolino G, Pedon L, Cesari M, et al. Lipoprotein-associated phospholipase A2 activity predicts cardiovascular events in high risk coronary artery disease patients. PloS One, 2012, 7: e48171.

[6] Tellis CC, Tselepis AD. Pathophysiological role and clinical significance of lipoprotein-associated phospholipase A2 (Lp-PLA2) bound to LDL and HDL. Curr Pharm Des, 2014, 20: 6256-6269. 

[7] Xu RX,  Zhang Y, Li XL, et al. Relationship between plasma phospholipase A2 concentrations and lipoprotein subfractions in patients.